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重组VWF配方代下载

重组VWF配方

[0001] 本申请为国际申请日2008年12月23日、国际申请号PCT/US2008/088201于2010年8月20日进入中国国家阶段、申请号200880127339.0、发明名称“重组VWF配方”的分案申请。

[0002] 本申请要求于2007年12月28日提交的美国临时申请No.61/017,418、以及于2007年12月31日提交的美国临时申请No.61/017,881的优先权,在此将其全部内容并入本文以

作为参考。

技术领域

[0003] 本发明一般涉及重组VWF的配方和制备包含重组VWF的组合物的方法。

背景技术

[0004] 冯维勒布兰特因子(VWF)被是在血浆中循环的糖蛋白,是一系列大小在约500至20,000kD范围内的多聚体。多聚体形式的VWF由通过二硫键连接在一起的250kD的多肽亚基

组成。VWF介导原始血小板粘附至受损血管壁的内皮下。仅较大的多聚体显示出止血活性。

根据假设,内皮细胞分泌大聚合体形式的VWF,并且那些具有低分子量的VWF形式(低分子量

VWF)由蛋白水解切割而产生。具有大分子质量的多聚体储藏在内皮细胞的怀布尔-帕拉德

(Weibel-Pallade)体中,并且一旦受到刺激就被释放出来。

[0005] VWF是作为基本上由重复的结构域组成的预前体VWF(prepro-VWF)由内皮细胞和巨核细胞合成的。一旦切割信号肽,前VWF就通过位于C-末端区域的二硫键发生二聚化。该

二聚体用作为用于多聚化的原聚体,这取决于在自由端末端之间的二硫键。组装成多聚体

之后,蛋白水解除去前体肽序列(Leyte et al.,Biochem.J.274(1991),257-261)。

[0006] 由克隆的VWF cDNA预测的最初翻译产物是2813个残基的前体多肽(预前体VWF)。预前体VWF由一个有22个氨基酸的信号肽和一个有741个氨基酸的前体肽组成,成熟VWF包

含2050个氨基酸(Ruggeri Z.A.和Ware,J.,FASEB J.,308-316(1993))。

[0007] 在VWF中的缺失与冯维勒布兰特疾病(VWD)有因果关系,其特征为或多或少呈现出血表现型。3型VWD是最严重的形式,其中VWF完全消失;而1型VWD涉及VWF的定量丢失,并且

其表现型能够非常温和。2型VWD涉及VWF的定性缺失,并且能够像3型VWD一样严重。2型VWD

具有许多子形式,一些子形式与高分子量多聚体的丧失或降低有关。2a型冯维勒布兰特综

合症(VWS-2A)的特征为中等和大的多聚体的同时丢失。VWS-2B的特征为最大分子量的多聚

体的丢失。与VWF有关的其他疾病和紊乱在本技术领域是已知的。

[0008] 美国专利No.6,531,577、7,166,709,以及欧洲专利申请No.04380188.5描述了源于血浆的VWF配方。然而,除源于血浆的VWF数量和纯度结果之外,还存在血液携带的病原体

(例如,病毒和变异性克罗伊茨费尔特-雅各布病(vCJD)的风险。

[0009] 因此,存在开发稳定的包含重组VWF的药物配方的需要。

发明内容

[0010] 本发明提供了对包含重组VWF的组合物有用的配方,可得到高度稳定的药物组合物。稳定的药物组合物可用作治疗剂,用于遭受能够受益于给药重组VWF的紊乱或状况的个

体的治疗。

[0011] 在一种实施方式中,本发明提供了一种重组冯维勒布兰特因子(rVWF)的稳定液态药物配方,其包含:(a)rVWF;(b)缓冲剂;(c)一种以上盐;(d)可任选的稳定剂;以及(e)可任选的表面活性剂;其中,rVWF包含选自下组的多肽:a)SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列;b)a)的生物学活性类似物、片段或变体;c)被SEQ ID NO:1所示的多核苷酸编码的多肽;d)c)的

生物学活性类似物、片段或变体;以及e)被一种多聚核苷酸所编码的多肽,所述多聚核苷酸

可在适度严格的杂交条件下杂交至SEQ ID NO:1所示多聚核苷酸上;其中缓冲液由在约

0.1mM至约500mM范围内、并且其中pH在约2.0至约12.0范围内的pH缓冲剂组成;其中盐的浓

度为约1至500mM;其中稳定剂的浓度为约0.1至1000mM;并且其中表面活性剂的浓度为约

0.01g/L至0.5g/L。

[0012] 在另一个实施方式中,提供的上述配方中,rVWF包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。在另一个实施方式中,提供的上述配方中缓冲剂选自由柠檬酸钠、甘氨酸、组氨酸、Tris和这些试剂的组合物所构成的组。在又一个实施方式中,提供的上述配方中,缓冲剂是柠檬

酸盐。在本发明的再一个实施方式中,提供的上述配方中,pH在6.0-8.0、或6.5-7.3的范围

内。在相关实施方式中,提供的上述配方中,pH是7.0。在另一个实施方式中,提供的上述配方中,缓冲剂是柠檬酸盐并且pH是7.0。

[0013] 在再一个实施方式中,提供的上述配方中,盐选自由氯化钙、氯化钠和氯化镁所构成的组。在另一个实施方式中,提供的上述配方中,盐的浓度范围是0.5至300mM。在另一个

实施方式中,提供的上述配方中,盐是浓度为10mM的氯化钙。

[0014] 在另一个实施方式中,提供的上述配方中,rVWF包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列;其中,缓冲剂是柠檬酸盐并且pH是7.0;并且其中,盐是浓度为10mM的氯化钙。在再一个实施方式中,提供的上述配方中,rVWF包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列;其中,缓冲剂是柠檬酸钠并且pH是7.0;并且其中,盐是浓度为10mM的氯化钙和浓度为100mM的NaCl。

[0015] 本发明也可预期其他配方。例如,在一种实施方式中,提供的上述配方中,所述一种以上缓冲剂是浓度各自是3.3mM的组氨酸和Tris。在另一个实施方式中,提供的上述配方

中,pH是7.0。在又一个实施方式中,提供的上述配方中,第一种盐是浓度为30mM的氯化钠并且第二种盐是浓度为0.56mM的氯化钙。

[0016] 在本发明的再一个实施方式中,提供的上述配方中,稳定剂选自下组:甘露醇、乳糖、山梨糖醇、木糖醇、蔗糖、海藻糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、葡萄糖、棉籽糖、纤维二糖、龙胆二糖、异麦芽糖、阿拉伯糖、葡糖胺、果糖以及这些稳定剂的组合物。在另一个实施方式中,提供的上述配方中,稳定剂是浓度为7.8mM的海藻糖和浓度为58.6mM的甘露醇。

[0017] 在另一个实施方式中,提供的上述配方中,表面活性剂选自下组:毛地黄皂苷、TRITON X-100、TRITON X-114、吐温-20、吐温-80以及这些表面活性剂的组合物。在另一个

实施方式中,提供的上述配方中,表面活性剂是浓度为0.03g/L的吐温-80。

[0018] 在本发明的一个具体实施方式中,提供的上述配方中,rVWF包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列;其中,缓冲剂是浓度为3.3mM的组氨酸和浓度为3.3mM的Tris,pH 7.0;其中,第一种盐是浓度为30mM的氯化钠并且第二种盐是浓度为0.56mM的氯化钙;其中,稳定剂是

浓度为7.8mM的海藻糖和浓度为58.6mM的甘露醇;并且其中,表面活性剂是0.03g/L的吐温-

80。

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